Técnicas

1. Diagnóstico genético preimplantación (DGP)

Esta técnica se utiliza para el estudio genético de los preembriones obtenidos a partir de un ciclo de Fecundación in Vitro/ICSI, de tal manera que se puedan detectar con antelación posibles alteraciones cromosómicas o anomalías genéticas en el embrión antes de su transferencia al útero materno.

Se biopsian los embriones de buena calidad que evolucionan hasta un tercer día de desarrollo embrionario, sacando una célula de cada uno de ellos, las cuales serán analizadas genéticamente para estudiar si presentan o no alguna anomalía genética, seleccionando así los embriones sanos con un diagnóstico apto para transferir.

Las células extraídas de la biopsia se analizan mediante una técnica llamada PCR, que permite una amplificación del DNA. El resultado de la PCR puede seguir una de estas dos vías en función del tipo de DGP:

  • Técnica de aCGH: se utiliza para valorar las anomalías cromosómicas numéricas y/o estructurales de la biopsia practicada. Se utiliza en casos en los que la pareja puede tener como un número elevado de embriones con un número de cromosomas anormal, así como en aquellas que son portadoras de anomalías cromosómicas numéricas o estructurales.
  • Enfermedades monogénicas: permite determinar la presencia/ausencia de la alteración génica responsable de una enfermedad hereditaria. Se utiliza en embriones de parejas portadoras de enfermedades hereditarias.

Esta técnica está indicada en aquellas parejas que puedan tener:

  • Riesgo de transmitir a la descendencia enfermedades monogénicas o alteraciones cromosómicas.
  • Fallos de implantación tras varios ciclos de FIV/ICSI.
  • Abortos de repetición.
  • Edad materna avanzada.
  • FISH alterado en el ADN de los espermatozoides.

Según las leyes 35/1988 y 14/2006 sobre Técnicas de Reproducción Asistida toda intervención sobre el embrión con fines diagnósticos no tendrá otra finalidad de tratar una enfermedad o impedir su transmisión, con garantías razonables y contrastadas, y ello bajo los siguientes requisitos:

  • No se influye sobre los caracteres hereditarios no patológicos, ni se busca la selección de los individuos o la raza.
  • Debe realizarse en centros sanitarios autorizados y por equipos cualificados y dotados de los medios necesarios.
  • La pareja, o en su caso, la mujer sola haya sido debidamente informada sobre los procedimientos, pruebas diagnósticas, posibilidades y riesgos de la terapia propuesta y las haya aceptado previamente.
  • Que se traten enfermedades con diagnóstico muy preciso, de pronóstico grave o muy grave, y cuando ofrezcan garantías, al menos razonables, de la mejoría o solución del problema.
  • Existe un porcentaje variable de los embriones analizados en los que no es posible obtener ningún resultado concluyente, y que el equipo recomienda no transferir.
  • La biopsia de una o dos células del embrión no afecta al desarrollo del feto, debido a que las células embrionarias mantienen todo su potencial.
  • Puede ocurrir que las células analizadas no presenten alteraciones, pero que otras células del mismo embrión si tengan anomalías genética, este fenómeno se conoce como mosaicismo y limita la eficacia de la técnica.
  • El DGP es una técnica que conlleva un estrés añadido al embrión y en algunos casos puede afectar su viabilidad.
  • Se aconseja que la madre se someta a un diagnostico prenatal clásico (amniocentesis, biopsia de corion) para confirmar el diagnostico, ya que en la técnica del DGP existe un determinado índice de error

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2. Desarrollo embrionario

El éxito de un tratamiento de reproducción asistida es el nacimiento de un bebe sano, y para lograr dicho objetivo es prioritaria la formación, destreza y el potencial del embriólogo durante los días que el embrión vaya desarrollándose en el laboratorio. Una buena selección permite aumentar la tasa de implantación, transferir un único embrión y por ello reducir la tasa de gestaciones múltiples.

En la actualidad los laboratorios de reproducción están más familiarizados con la realización de un cultivo embrionario hasta alcanzar la formación de blasto (D+5), de esta forma la evolución del embrión aporta información relevante a la hora de su selección para transferir o para vitrificar.

Actualmente, en nuestro laboratorio más del 60% de los embriones alcanzan la fase de blastocisto, incrementando de esta forma la tasa de implantación y por ello de gestación. Sin embargo, hay que ser conscientes que cada ciclo evoluciona de forma individual y por ello debemos tratarlo de forma personalizada ya que el desarrollo hasta blasto necesita de un número de embriones adecuado o de una calidad embrionaria correcta los primeros días de desarrollo.

Para poder evaluar el desarrollo del embrión se utilizan parámetros que se observan de forma diaria.

Los ovocitos que han fecundado de forma correcta presentarán 2 corpúsculos polares (el ovocito maduro presenta 1 corpúsculo antes de ser fecundado) el segundo se genera durante la fecundación, y 2 estructuras pronucleares que indican que, en la mayoría de los casos, ha adquirido una dotación cromosómica correcta tras la unión de óvulo y espermatozoide. Una correcta fecundación no asegura que el embrión sea genéticamente idóneo en casos de problemas en cariotipos, abortos, edad materna elevada… en todos estos casos es necesario un diagnóstico genético preimplantacional. El resto de formas observadas en la fecundación que no correspondan a la imagen aquí representada, serán anomalías y por lo tanto NO pueden considerarse aptos para continuar un desarrollo embrionario.

Los ovocitos que hayan logrado fecundar correctamente continuarán su crecimiento en el laboratorio hasta ser transferidos y/o criopreservados. No todos los ovocitos fecundados correctamente llegarán a ser embriones viables, tendrán que ir cumpliendo día a día un correcto desarrollo. Comenzarán a dividirse hasta llegar a blastocisto, sin embargo en cada una de esas divisiones, el embriólogo lo catalogará con una categoría, en función de su potencial implantatorio y de unos parámetros utilizados.

Según ASEBIR (asociación para el estudio de la biología de la reproducción)

Un embrión puede entrar en una de estas 4 categorías en función de su potencial de implantación:

  • CATEGORIA A: Embrión de óptima calidad con máxima capacidad de implantación
  • CATEGORIA B: Embrión de buena calidad con elevada capacidad de implantación
  • CATEGORIA C: Embrión regular con probabilidad media de implantación
  • CATEGORIA D: Embrión de mala calidad con probabilidad baja de implantación

Los parámetros utilizados en estos estadios son, entre otros:

  • Número de células y división
  • Morfología
  • Simetría
  • Número de núcleos por célula
  • ragmentación

 

En D+2 el embrión denominado como A debe de presentar 4 células, del mismo tamaño, con un tanto por ciento de fragmentos menor al 10%. Valorando siempre la nucleación, presencia de vacuolas, aspecto del citoplasma, zona pelúcida…

 

 

 

En D+2 el embrión denominado como A debe de presentar 4 células, del mismo tamaño, con un tanto por ciento de fragmentos menor al 10%. Valorando siempre la nucleación, presencia de vacuolas, aspecto del citoplasma, zona pelúcida…

 


En D+4 el número de células que ha alcanzado el embrión debería ser difícil de contar ya que muestran un aspecto compactado, lo que se denomina mórula.

En D+5, después de la compactación celular se empieza a formar una cavidad que se denomina blastocele, comenzando a diferenciarse la masa celular interna y el trofoectodermo, alcanzando la formación de blastocisto.

El Trofoectodermo es la estructura que formará la placenta. Se caracteriza por una monocapa de células muy unidas entre sí, que tapizan la cavidad del blasto. En función del número, forma y fusión de las células, el trofoectodermo aportara una calidad al blasto (A-D).

La Masa Celular interna es la estructura que formará el feto. Debe de tener forma ovalada y sus células deben estar lo más compactadas posibles. El diámetro de la masa celular interna, para que el blasto sea de buena calidad, debería ser comparable a un embrión de 4 células.

El blastocisto según su evolución puede ser:

  • Blastocisto temprano: Cuando comienza a formar la cavidad pero no puede diferenciarse masa y trofo.
  • Blastocisto cavitado: El blastocele ocupa más del 50% del embrión
  • Blastocisto expandido: El blastocele está totalmente expandido y se observa tanto la masa celular interna que da lugar al embrión, como el trofoectodermo que formará la placenta.
  • Blastocisto Hatching: El blastocisto comienza a salir por la zona pelúcida.

Aquellos embriones que presenten evolución hasta día 5 y no sean transferidos, se vitrificaran, y aquellos que en D+5 presenten evolución, pero no hayan adquirido el estadio necesario para su vitrificación, se mantendrán un día más en cultivo, hasta D+6 para su evaluación y sin son aptos, se criopreservarán con el resto.

Las ventajas del cultivo largo son una mejor selección de los embriones más óptimos, tanto para transferir y/o vitrificar, obteniendo un mayor porcentaje de implantación, y una mejor sincronización entre la receptividad endometrial y el embrión. Sin embargo, no siempre se puede elegir esta opción, ya que cada ciclo es diferente y no todos los embriones tienen el mismo poder de desarrollo.

Esta técnica está indicada en los siguientes casos:

  • Ciclos de FIV-ICSI con un número óptimo de embriones viables y de buena calidad
  • Fallos repetidos de implantación
  • En ciclos con DGP (Diagnóstico Genético Preimplantacional)

Solicita una cita en clínica ginecológica GINFER y cuéntanos tu problema, sabemos como podemos ayudarte.

3. FISH (Hibridación In Situ Fluorescente) en espermatozoides

Esta técnica se utiliza como una prueba diagnóstica del semen, la cual permite estudiar el material genético de los gametos masculinos, de manera que nos da a conocer si el varón posee o no una mayor fracción de espermatozoides con alteraciones cromosómicas, en concreto, la presencia o ausencia de ciertos cromosomas.

Cada célula (espermatozoide) debe contener una dotación cromosómica normal de 23 cromosomas, pero existe una cierta proporción de gametos masculinos con un número de cromosomas anómalo. Es aquí donde el FISH determina la cantidad de espermatozoides con una dotación cromosómica anómala, y de esta manera se valora si supera o no el límite de normalidad.

Se analizan a través de unas sondas fluorescentes que se unen específicamente a un determinado cromosoma. De forma habitual, los cromosomas más analizados son cinco: los cromosomas sexuales (X e Y) y los cromosomas 13, 18 y 21.

Esta técnica está indicada en los siguientes casos:

  • Alteración acusada del semen (movilidad, motilidad o morfología)
  • Fallos previos de implantación
  • Abortos de repetición

En caso de que salga un FISH alterado, con un mayor nivel de espermatozoides con una dotación cromosómica anómala, se recomienda realizar un ciclo de FIV/ICSI con Diagnóstico Genético Preimplantacional (DGP), para seleccionar los embriones sanos previamente a la transferencia.

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4. Fragmentación de ADN espermátivo

Esta técnica se utiliza como una prueba diagnóstica adicional para medir la integridad del material genético de los espermatozoides, analizando las roturas o lesiones en las cadenas del ADN de cada espermatozoide.

Un alto nivel de fragmentación del ADN en las células del esperma, puede representar una causa de infertilidad masculina importante, y por tanto, cuando presenta unos valores por encima del umbral crítico, compromete significativamente las posibilidades de un embarazo exitoso.

Una alta fragmentación de ADN espermático también puede afectar a la división celular de los embriones cuando se activa el material genético paterno a partir del día 3 de cultivo, impidiendo el desarrollo posterior a blastocisto hasta su detención, fallos de implantación, abortos de repetición.

En nuestra Unidad de reproducción asistida, realizamos un exhaustivo estudio de la fragmentación del ADN del espermatozoide tanto de cadena sencilla como el de cadena doble, ya que el paciente puede presentar roturas elevadas solo de un tipo o de los dos.

  • Fragmentación en la cadena sencilla: está asociada a una menor tasa de fecundación.
  • Fragmentación en la cadena doble: asociado a un peor desarrollo embrionario, menor número de embriones en blastocisto, o posibles anomalías cromosómicas en los embriones que desarrollen.

Una vez conocido el porcentaje de fragmentación, nuestros facultativos te informaran de la técnica más adecuada a realizar para eliminar el mayor porcentaje de espermatozoides con ADN fragmentado y aumentar con ello la tasa del ciclo.

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5. MACS (Columnas de Anexina V)

Esta técnica de selección espermática permite separar los espermatozoides más óptimos y sanos, de los espermatozoides apoptóticos que están destinados a morir.

El proceso de apoptosis, o muerte celular programada, se produce en aquellos espermatozoides que tienen daños celulares (fragmentación del ADN espermático) y presentan en su membrana celular un fosfolípido (fosfatidilserina) que diferencia a las células sanas de las dañadas.

Las MACS, o Columnas de Anexina V, reconocen estos espermatozoides dañados que contienen fosfatidilserina, y por atracción magnética se quedan adheridos a las paredes de las columnas de anexina, eliminado así la mayor parte de los espermatozoides defectuosos, y dejando pasar los espermatozoides sanos que se usarán en las técnicas de FIV/ICSI incrementando así las posibilidades de embarazo.

Esta técnica está indicada especialmente en los siguientes casos:

  • Pacientes con un alto porcentaje de fragmentación de ADN en los espermatozoides
  • Pacientes con baja tasa de fecundación o mala calidad embrionaria
  • Pacientes con fallos repetidos en anteriores tratamientos con causa no aparente
  • Pacientes con abortos de repetición

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6. FERTILE®cHIP

El Chip Fertile® es una técnica novedosa utilizada para mejorar la selección de los espermatozoides antes de realizar el ICSI o microinyección espermática.

Este dispositivo, de uso individual para cada paciente, sirve para separar los espermatozoides que tienen elevado porcentaje de fragmentación de doble cadena de ADN de los que no están fragmentados.

La rotura de ADN de doble cadena va a repercutir en el desarrollo embrionario impidiendo que los embriones lleguen hasta la formación de blastocisto, o lo hagan con una peor calidad. Esto conlleva una disminución en las tasas de implantación, o un aumento en el riesgo de abortos asociados al factor masculino.

La única forma de minimizar estos daños producidos por la fragmentación del ADN en el espermatozoide es evitar que un espermatozoide dañado fecunde al ovocito, es decir, seleccionarlo y eliminarlo mediante el chip, ya que el ovocito no tiene ningún sistema de reparación para eliminarlo por si mismo.

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7. Biopsia testicular

La biopsia testicular es una técnica de recuperación espermática directamente desde el testículo.

Cuando el paciente no puede obtener una muestra seminal con espermatozoides mediante eyaculación, ya sea en casos de azoospermia o en pacientes que tienen una vasectomía hecha, se pueden recuperar espermatozoides cogiendo una muestra de tejido testicular, en la cual se aíslan los espermatozoides para congelarlos y posteriormente usarlos en un ciclo de fecundación in vitro.

Se trata de una cirugía mínima ambulatoria, realizando una pequeña incisión con anestesia local o sedación.

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8. Vitrificación

La vitrificación es una técnica de Reproducción Asistida que se emplea para la criopreservación de óvulos y embriones, lo que permite que sean conservados o preservados durante un periodo de tiempo indefinido y permanezcan inalterables en su estructura celular interna.

La vitrificación consiste en una congelación ultrarrápida de las células sumergiéndolas rápidamente en nitrógeno líquido a -196ºC evitando así la formación de cristales de hielo, los cuales podrían dañar estructuras intracelulares de los óvulos o embriones (fenómeno que ocurría a menudo con la técnica antigua de congelación de los ovocitos o embriones, conocida como congelación lenta). De esta manera, se consiguen mejores resultados en el momento de su desvitrificación y posterior supervivencia, aproximadamente de un 90% (ASEBIR).

Los ovocitos o embriones se vitrifican en unos soportes especiales llamados pajuelas (Cryotop®), los cuales se sumergen rápidamente en el nitrógeno líquido y seguidamente se almacenan en los tanques de nitrógeno a la misma temperatura de -196ºC. Aquí, quedan perfectamente guardados e identificados individualmente por cada paciente.

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